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熱烈祝賀中實(shí)同創(chuàng)新品PCR試劑盒系列產(chǎn)品上市啦
Supersmart 5×快速SYBR Green qPCR預(yù)混液
產(chǎn)品貨號(hào)：ZS-M-1009
產(chǎn)品規(guī)格：50TX50ul體系
所屬類別：熒光定量PCR
簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用穩(wěn)定高效的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系 5× RT Master mix進(jìn)行RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，使用時(shí)只需加入模板、引物和 RNase Free H2O即可，大大簡(jiǎn)化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差和RNA的降解可能。Master mix中添加了HL dsDNase（熱敏雙鏈特異性核酸酶），該雙鏈特異性核酸酶可在反轉(zhuǎn)錄的過程中，直接高效降解去除RNA中殘留的基因組DNA污染(可去除100 ng基因組DNA)，從而在定量PCR的檢測(cè)中無需考慮基因組污染的干擾，設(shè)計(jì)的定量PCR引物也無需進(jìn)行橫跨外顯子。該試劑盒尤其適用于定量PCR檢測(cè)。
該預(yù)混體系包含點(diǎn)突變致RNase活性缺失的MuLV Reverse Transcriptase反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP、反應(yīng)Buffer、HL dsDNase和RNase Inhibitor。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA。同時(shí)經(jīng)過突變文庫(kù)篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受 55℃高溫反應(yīng)，從而進(jìn)一步提高了其反轉(zhuǎn)錄效率和反應(yīng)速率。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜 RNA模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長(zhǎng)度和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。高溫反轉(zhuǎn)錄對(duì)于高GC含量RNA的反轉(zhuǎn)錄，能有效減少二級(jí)結(jié)構(gòu)，提升反轉(zhuǎn)錄效率。在通讀GC含量高，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板和反轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)片段cDNA等方面的表現(xiàn)突出。精心優(yōu)化的反應(yīng) Buffer使逆轉(zhuǎn)錄酶應(yīng)用范圍更廣，對(duì)后續(xù)的PCR以及定量PCR實(shí)驗(yàn)兼容性高。合成的第一鏈cDNA 可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴(kuò)增、Real-Time PCR 反應(yīng)等,以及cDNA文庫(kù)的構(gòu)建，尤其是反轉(zhuǎn)錄所得目的基因的克隆等。還可以通過反轉(zhuǎn)錄用于DNA探針的熒光、生物素、地高辛或同位素標(biāo)記等。
用途：
（1）該制品可有效反轉(zhuǎn)錄 mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA等
（2）該制品不可反轉(zhuǎn)錄 microRNA、病毒 DNA/RNA 樣品
組分：
名稱 | 50T | 100T |
5× RT Master mix (with HL dsDNase) | 200 μl | 400 μl |
20× Oligo dT & Random Primer | 50 μl | 100 μl |
RNase Free H2O | 1 ml | 1 ml × 2 |
使用方法：
1. 按以下組分配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液
Total RNA or Poly(A) RNA | 0.1-2 μg |
5× RT Master mix(with HL dsDNase) | 4 μl |
*20×Oligo dT & Random Primer | 1 μl |
Rnase Free H2O | Up to 20 μl |
*注：反轉(zhuǎn)錄引物可根據(jù)需要改用特異性引物。
2.根據(jù)實(shí)際情況反轉(zhuǎn)錄可選擇快速程序或標(biāo)準(zhǔn)程序
快速程序
37°C 15~30min
85°C 5min
標(biāo)準(zhǔn)程序
25°C 10min
55°C 30~60min
85°C 5min
注：通常在定量 PCR 實(shí)驗(yàn)中使用快速程序進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄效率>80%），在進(jìn)行高GC含量、含復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)、長(zhǎng)片段的模板轉(zhuǎn)錄時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)程序（反轉(zhuǎn)錄效率>100%）。
中實(shí)同創(chuàng) Q公司
β-actin
mcp
Fig 1. SupersmartTM TRIZOL裂解液提取的小鼠心肌細(xì)胞HL-1的RNA，中實(shí)基因該反轉(zhuǎn)錄試劑盒與其他品牌反轉(zhuǎn)錄試劑盒比較，使用2×Hi SYBR Green qPCR Mix對(duì)基因β-actin和MCP進(jìn)行qPCR檢測(cè)Actin和MCP基因。
注意事項(xiàng)：
如 5× RT Master mix (with HL dsDNase)出現(xiàn)沉淀屬正常現(xiàn)象，可用手捂化，混合均勻后使用不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
儲(chǔ)存：
請(qǐng)置于-20°C，可保存 3 年；避免反復(fù)凍融。
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